ELISA是一種十分常用的定性定量方法，人體和動物、體外細(xì)胞培養(yǎng)中超過80％蛋白定量都使用其作為檢測的 手段。ELISA試劑盒價格一般非常昂貴，但各家試劑公司的質(zhì)量卻良莠不齊。ELISA的試劑盒有用于科研的，也有用于臨床診斷的。應(yīng)用于臨床診斷的試 劑盒必須有衛(wèi)生部的許可文號，國家對應(yīng)用于臨床診斷的試劑盒有嚴(yán)格的規(guī)定和要求，制定相關(guān)的手則來管理試劑盒的質(zhì)量。
而應(yīng)用于科研的試劑盒，國家則沒有出臺相關(guān)的質(zhì)量管理規(guī)定，因此試劑盒質(zhì)量也就無法保障。在這種情況下，許多劣質(zhì)的試劑盒在市面泛濫，不少同行戰(zhàn)友為此浪費(fèi)了大量的時間和金錢，卻沒有得到一個良好的實驗結(jié)果。下面給戰(zhàn)友們介紹一下如何判斷試劑盒的質(zhì)量，選購好的試劑盒。
一、仔細(xì)閱讀說明書，對說明書的內(nèi)容有一個詳細(xì)的了解。
審查內(nèi)容包括：
1. 試劑盒的名稱：ELISA試劑盒名稱一般由“（物種）＋（測定指標(biāo)）＋酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）”，物種和測定指標(biāo)不能搞錯，否則買錯了就是你的事情；另外有的試劑盒說明書試劑盒名稱明顯與寫在試劑盒上的名稱不符，這要引起你的警惕。
2. 用途：應(yīng)用于科研還是臨床診斷，用于臨床診斷的有衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號。
3. 測定原理：現(xiàn)在ELISA試劑盒除非是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統(tǒng)， 還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競爭法，這類方法適用于半抗原的測定。具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗，否則背景很高。當(dāng)然 如果兩個都是單抗（這兩個單抗針對不同表位），那么測定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個用單抗，一個用多抗，測定的靈敏度會較高。某些簡單的化 合物用ELISA測定時，因為沒有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。如果你發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物（如雌激素、NO、地高辛等）用 雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。
一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所 謂的“鉤狀效應(yīng)”(hook eHect)，也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現(xiàn)象”(zone phenomenon)。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太高，有時會出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象，此時要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測定。
4. 試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時，試劑盒的組成一般包括：
已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實驗時暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。
