人（Human）MICA抗體（MICA）ELISA試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先
包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過
溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化
成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長
下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人MICA
抗體（MICA）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1。 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞
刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地
分離。
2。 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3。 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4。 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5。 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1。 酶標(biāo)儀（450nm）
2。 高精度加樣器及槍頭：0。5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3。 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1。 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解
后再使用。
2。 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3。 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL 加樣即可。4。 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5。 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
陰性對(duì)照0。5mL 0。5mL 無
陽性對(duì)照0。5mL 0。5mL 無
檢測抗原-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個(gè)1 個(gè)無
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1。 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。
2。 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
操作步驟
1。 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封
袋密封放回4℃。
2。 設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、
陽性對(duì)照各50μL；
3。 待測樣本孔加待測樣本50μL；
4。 隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）
標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫
箱溫育60min。
5。 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6。 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7。 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
1。 試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔OD 值平均值≥1。00；
陰性對(duì)照孔OD 值平均值≤0。15。
2。 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0。15
3。 陰性判斷：樣品OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4。 陽性判斷：樣品OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性
試劑盒性能
1。 準(zhǔn)確性：陽性對(duì)照孔OD 值平均值≥1。00；陰性對(duì)照孔OD 值平均
值≤0。15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2。 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3。 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4。 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5。 有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1。 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所
產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2。 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者
承擔(dān)。
