peprotech細胞因子注意事項
目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括：ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學(xué)、限制性稀釋分析(limiting dilution analysis，LDA)和單細胞PCR，應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法觀察細胞因子蛋白表達及mRNA表達可以識別Th1和Th2細胞，此方法可獲得較強的細胞內(nèi)信號，但此方法工作量大、主觀性強，難以進行大樣本檢測，且人肉眼識別能力有很大的局限性，而ELISPOT及單細胞PCR技術(shù)，技術(shù)性強、勞動強度大，難以進行廣泛推廣。隨著多標記及胞內(nèi)細胞因子標記流式細胞技術(shù)的出現(xiàn)，使對細胞內(nèi)細胞因子的研究推向了一個新的階段。下面主要對胞內(nèi)細胞因子流式細胞技術(shù)作以介紹。
早期細胞因子表達與細胞功能相關(guān)性研究是基于特定克隆">克隆細胞的激活。盡管研究應(yīng)用T淋巴細胞克隆">)與TH2(IL－4，IL－5，IL－10)，但這些研究很難外推，因為T細胞克隆"g克隆證明了不同細胞因子的合成，如TH1(IL－2，IFN－>克隆與體內(nèi)T細胞功能相關(guān)性還未被揭示。
近來，Jung與Picker采用了monensin、PMA等藥物預(yù)孵，用Brefeldin(BFA)、Monensin阻斷了胞內(nèi)高爾基體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運的方法使得細胞因子聚集，蓄積，增強細胞因子信號可被流式細胞儀檢測。因為自然狀態(tài)下，T淋巴細胞產(chǎn)生少量的細胞因子，通常要對T淋巴細胞體外活化進行研究。在體外刺激過程中，T淋巴細胞產(chǎn)生的細胞因子已釋放出來，胞內(nèi)細胞因子信號較弱，難以進行檢測。這一方法可檢測單個細胞內(nèi)多個細胞因子，并可區(qū)分表達特定細胞因子的細胞亞群。在細胞水平該方法證明了人與鼠的淋巴細胞都存在1型與2型分化，且這些分化在特定細胞因子增強時可被逆轉(zhuǎn)。且這些研究清楚地證明，只有激活的細胞亞群可以表達細胞因子，靜止的正常淋巴細胞(T、B、NK)不能分泌細胞因子。
胞內(nèi)流式分析法是用抗細胞因子抗體與細胞表面或胞內(nèi)特定亞群標志組合，即可檢測不同細胞亞群細胞因子的分泌，同時采用特殊的化學(xué)與抗體選擇，確保靜止與無細胞因子分泌細胞的最小熒光背景。具有其它方法難以比擬的優(yōu)點：
快速：流式定量檢測細胞內(nèi)細胞因子可在一天內(nèi)完成，實驗流程需6-8小時，實際操作時間為1-2小時，快速簡便；
簡便：無需組織培養(yǎng)，可以全血分析，無需分離PBMCs；
靈敏度高：高度靈敏的熒光標記與檢測系統(tǒng)；
高效：可以在同一個細胞內(nèi)同時檢測兩種或更多種細胞因子，也可根據(jù)細胞免疫表型區(qū)分分泌細胞因子的細胞的亞型，進行多參數(shù)相關(guān)分析；
安全：減少樣本處理與生物源性污染
接近生物體的分析條件：全血檢測保留細胞及生化微環(huán)境更準確反映了體內(nèi)狀況
