探針標(biāo)記各種標(biāo)記物及選擇方法
1．核素標(biāo)記物放射性核素是目前應(yīng)用最多的一類探針標(biāo)記物。放射性核素的靈敏度極高，可以檢測(cè)到10-14～10-18克的物質(zhì)，在最適條件下可以測(cè)出樣品中少于1000個(gè)分子的核酸含量。常用標(biāo)記核酸探針的核素有32P、3H、35S，在Southern印跡雜交中以“P最常用。還應(yīng)根據(jù)標(biāo)記方法的不同選擇相應(yīng)標(biāo)記方位的核素，一般情況下，大多數(shù)標(biāo)記方法需要的是a—32P，而5，末端標(biāo)記必須是r-32P。
2．非放射性標(biāo)記物多年來，科學(xué)家們致力于尋找一些安全、可靠、靈敏度高的物質(zhì)代替放射性核素用于核酸分子雜交，并取得了一定的進(jìn)展，部分非放射性標(biāo)記物已在國(guó)內(nèi)外逐步推廣使用。其優(yōu)點(diǎn)是無放射性污染，可以較長(zhǎng)時(shí)間存放，從而更便于臨床診斷等方面的應(yīng)用。但此類非放射性標(biāo)記物的缺點(diǎn)是靈敏度及特異性都不太高。根據(jù)其檢測(cè)方法，非核素標(biāo)記物可分為以下4類。
(1)半抗原：生物素(biotin)和地高辛(DIG)都是半抗原，可以利用這些半抗原的抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)，根據(jù)顯色反應(yīng)檢測(cè)雜交信號(hào)。這兩種物質(zhì)是目前使用較普遍的非核素標(biāo)記物。
(2)配體：生物素不僅是半抗原，故可用生物素與親和素反應(yīng)進(jìn)行雜交信號(hào)的檢測(cè)。
(3)熒光素：如FITC、羅丹明類等，可以被紫發(fā)出熒光進(jìn)行觀察，主要適用于細(xì)胞原位雜交。
(4)化學(xué)發(fā)光探針：一些標(biāo)記物可與某種物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，通過化學(xué)發(fā)光可以像核素一樣直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光�；瘜W(xué)發(fā)光探針可能是今后非核素標(biāo)記物研究的主要方向。
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