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DIY夾心法ELISA常見技術(shù)
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| 編輯：
www.tools.pengdekai.cn
時間：
2012-08-06
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www.tools.pengdekai.cn |
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DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南：
1、選擇抗體時最好選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；最好從同一家公司選擇抗體對。
2、ELISA實驗中為了確定最佳信號和最低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
3、標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。
4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。
6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7、當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.
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