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間接法操作elisa試劑盒
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時(shí)間：
2012-09-04
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間接法操作elisa試劑盒
文章來(lái)自：http://www.tools.pengdekai.cn/
間接法用于檢測(cè)未知抗體的elisa試劑盒
elisa試劑盒步驟如下：
1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜；
2.第二日日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌； 6.’最后一遍用DDW洗滌。
6.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
7.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
8.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
操作以上步驟完畢后，就可以知道結(jié)果了。
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