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    在ELISA試劑盒中雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下：
    1.將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
    2.加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
    3.加海標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與紜本中受檢抗原的量相關(guān)。
    4.加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色物。通過比色，測知標(biāo)本由抗原的量。
    在臨床檢驗中，此法適用于檢測各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HbsAg、HbaAg、AFP、HCG等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和海標(biāo)用
的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很髙的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)。

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