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ELISA試劑盒的雙抗體夾心法
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時(shí)間：
2012-09-19
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ELISA試劑盒的雙抗體夾心法
在ELISA試劑盒一步法測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過證抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成“夾心復(fù)合物”。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同，
如按常法測(cè)讀，所得結(jié)果將低于實(shí)陡的含景，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增髙的物質(zhì)時(shí),應(yīng)注意可測(cè)范圍的最高值。用髙親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
ELISA試劑盒雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，伹不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
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