淺談peprotech細(xì)胞因子使用
peprotech細(xì)胞因子在使用中應(yīng)該注意一些什么呢？peprotech細(xì)胞因子操作過(guò)程是怎么樣的呢？今天我們?cè)敿?xì)講解下。
peprotech細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等)，并且通常以最少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁...淺談peprotech細(xì)胞因子使用
peprotech細(xì)胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等)，并且通常以最少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理，因此微量的peprotech細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見(jiàn)到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象)。
1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2．溶解(Recotitution)：用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行選擇)溶解至說(shuō)明書(shū)要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產(chǎn)品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時(shí)不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞因子完全溶解后使用。溶劑的選擇：
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過(guò)高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請(qǐng)依照說(shuō)明書(shū)上的濃度，同樣也是為了避免過(guò)高的鹽濃度。
3．分裝和貯存(Aliquot and Storage)：蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液，稀釋可用RPMI 1640、DMEM或等溶液，其中最好含有5-10%的FCS (小�；蛱ヅＱ�)或0.5 %的A(牛血清白蛋白)來(lái)穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存1周，如需長(zhǎng)期保存，則需分裝凍存于-20℃ (注意：不可凍存于-80℃)。分裝時(shí)每管中工作液的體積最好是一次實(shí)驗(yàn)的用量，以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液，避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低
