PeproTech公司的重組細(xì)胞因子產(chǎn)品經(jīng)過了十分嚴(yán)格的生產(chǎn)、純化及質(zhì)檢過程,保證其在投放市場之前,達(dá)到如下要求:
1. 真實性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實性。
2. 純度:應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。
3. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測。
4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,SDS-PAGE電泳檢測;必要時應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。
6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
產(chǎn)品隨附的說明書上載有產(chǎn)品的各項相關(guān)信息。請仔細(xì)閱讀這些信息,了解其配制和貯存提示。如果在閱讀說明書后仍需更多信息,請查看以下常見問題解答,或致電我們的技術(shù)服務(wù)部門。
重組細(xì)胞因子的凍干狀態(tài)
與市場上已有的其他蛋白產(chǎn)品不同,PeproTech細(xì)胞因子不含carrier protein或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等),而是以低鹽的形式做凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。PeproTech的質(zhì)控過程確保每管裝有非常準(zhǔn)確量的蛋白產(chǎn)品。所以我們建議在收到試劑后,務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒,使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低(此時能否見到白色沉淀均屬正,F(xiàn)象)。
重組細(xì)胞因子活性單位(units)的換算
各公司在開發(fā)出重組細(xì)胞因子并檢測其活性后,通常會以ED50(半數(shù)有效濃度)或units(活性單位)來標(biāo)識其細(xì)胞因子的生物活性。因此1mg細(xì)胞因子中所含的活性單位(units)可以理解為將1mg/ml細(xì)胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數(shù),
以下是二者的換算公式:
1x106
_______________ = specific activity (units/mg)
ED50(ng/ml)
重組細(xì)胞因子的穩(wěn)定性
除非產(chǎn)品說明書上另有特別說明,否則所有PeproTech蛋白產(chǎn)品都為凍干粉形式,在室溫下也能保持很好的穩(wěn)定性。但是,我們推薦凍干產(chǎn)品最好保存于-20℃。大多數(shù)凍干產(chǎn)品經(jīng)溶解和稀釋后,可短時間保存于4℃;若要進(jìn)行較長時間保存,
我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein(如0.1% BSA),然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性,應(yīng)避免反復(fù)凍融。
重組細(xì)胞因子的交叉活性
除了少數(shù)例外,大多數(shù)人類細(xì)胞因子對小鼠細(xì)胞都有活性。許多小鼠細(xì)胞因子對人類細(xì)胞也有活力表現(xiàn),但是與相應(yīng)的人類細(xì)胞因子相比比活力較低。一些人類的細(xì)胞因子如IL-7在小鼠細(xì)胞中甚至表現(xiàn)出比相應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子更高的比活力。
而干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物種特異性的,對于非人類細(xì)胞幾乎沒有活性。相反,成纖維細(xì)胞生長因子 (FGFs) 和神經(jīng)營養(yǎng)因子 (neurotrophins) 是高度保守的,在其它的動物物種細(xì)胞中也能表現(xiàn)很好的活性。
.離心(Centrifuge):高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/ml)。溶解時不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細(xì)胞因子完全溶解后使用。
溶劑的選擇:
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周,如需長期保存,最好在稀釋液中加入10%的FCS(小;蛱ヅQ澹┗0.1 %的BSA(牛血清白蛋白)或5% HAS(人血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白,然后需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-50℃以下)。分裝時每管中工作液的體積最好是一次實驗的用量,以實現(xiàn)每次實驗用完一支工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。
細(xì)胞因子量極微,所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮魇潜匦璧,任何不適當(dāng)?shù)娜芙舛紩斐蓪嶒灥氖,造成大量的浪費(fèi)。請謹(jǐn)慎操作!
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