免疫組織化學技術(shù)是利用免疫學抗體與抗原結(jié)合的原理以及細胞化學技術(shù)對組織、細胞特定抗原或抗體進行定位定量研究的技術(shù)。它廣泛應用于生物學、組織解剖學、病理學等［1］。做免疫組化不外乎兩種方法:漂片法或貼片法［2］。然而，前者容易爛片，不適合做腦片等大而易碎的組織;后者方法較好，但為了保持良好的結(jié)果和節(jié)省抗體，常常需要免疫組化筆。免疫組化筆無論是國產(chǎn)還是進口，都有下油不利或下油過多、污染片子、隔水性差、圈片數(shù)量少等弊病，且價格昂貴。我們通過多次實驗，摸索出一種自制的簡易組化筆，其防水性好、價格低廉、可保證免疫組化效果。
1制作免疫組化筆材料與方法
1.1材料
1.1.1實驗用品和器械樹膠2ml（中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司）、一次性筷子數(shù)根、衛(wèi)生棉少許、手術(shù)刀片一個、30張貼有腦片的載玻片（每張載玻片2張腦片）、0.05M的PBS、BDNF抗體、0.3%Triton、ABC試劑盒、濕盒、DAB顯色劑、恒溫細胞培養(yǎng)箱、冰箱、普通顯微鏡等。
1.1.2實驗分組實驗分三組:甲組用美國進口免疫組化筆畫圈;乙組用國產(chǎn)一般免疫組化筆（北京中杉公司生產(chǎn)）畫圈;丙組用自制簡易組化筆畫圈。每組15張載玻片（30張腦片）。
1.2方法
1.2.1免疫組化筆的制作方法將一次性筷子從中間折短，分成兩根，削尖一端，把尖端用少許棉花裹緊，這樣就制成了一只簡易筆。
1.2.2代替免疫組化筆的方法用一小瓶倒入2ml樹膠，將自制簡易筆蘸少量樹膠，圍繞片子周圍0.2cm處畫圈，不能覆蓋片子。
1.2.3免疫組化ABC法［3］（1）0.05MPBS漂洗5min×3次;（2）3%H2O2/0.05MPBS漂洗，室溫30min;（3）0.05MPBS漂洗5min×3次;（4）5%羊血清37℃30min;（5）免疫抗體BDNF（1:500）4℃過夜;（6）0.05MPBS漂洗5min×3次;（7）Ⅱ抗37℃1.5h;（8）0.05MPBS漂洗5min×3次;（9）AB復合物37℃1.5h;（10）0.05mPBS漂洗5min×3次;（11）DAB顯色5～10min;（12）三蒸水漂洗5min×3次;（13）梯度酒精脫水，二甲苯通透，樹膠封片，鏡下觀察。
1.2.4結(jié)果觀察及統(tǒng)計學處理觀察整個實驗過程中用自制簡易組化筆畫圈的防水性效果;鏡下觀察BDNF免疫陽性反應物的表達情況，將所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理、分析。
2結(jié)果
2.1三種免疫組化筆防水率的比較美國產(chǎn)免疫組化筆的防水率為90%;國產(chǎn)免疫組化筆的防水率為80%;而自制免疫組化筆的防水率可達98%。
2.2三種免疫組化筆對BDNF免疫陽性結(jié)果的影響鏡下大體觀察發(fā)現(xiàn):用自制免疫組化筆畫圈的切片陽性結(jié)果良好，而用美國產(chǎn)免疫組化筆畫圈的切片雖有陽性結(jié)果，但片子周圍有污染現(xiàn)象。
