elisa試劑盒檢測(cè)說(shuō)明
1、試劑
(1)5%與2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制；
(2)牛血清白蛋白(BSA)緩沖液：用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.01mol/LEDTA、0.1%硫柳汞、0.05%Tween20及4%BSA；
(3)HRP-SPA用改良過(guò)碘酸鈉法將SPA與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)制成結(jié)合物，最適工作濃度以方陣法滴定；
(4)熱聚合人IgG：人IgG10mg/ml，63℃加熱20min制成。
2、把持步伐
(1)用PBS稀釋SPA成5Ps/ml，包被聚苯乙烯反應(yīng)板微孔，每孔0.1ml( 比力孔不包被)，置4℃ 過(guò)夜后洗滌3次備用；
(2)待測(cè)血清0.05ml加PBS0.15ml和5%PEG0.2ml混勻，4℃ 過(guò)夜后1600r/min離心20min，棄上清，沉淀用2.5%PEG洗2次，加入PBS0.2ml和BSA緩沖液0.2ml，混勻，置37℃水浴30min，擺蕩，使徹底溶解；
(3)將已溶解的待測(cè)血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中，置37℃60min，洗3次；各孔加底物溶液(OPD—H202)0.1ml，37℃20min使呈色。每孔加2mol/LH2S041滴終止反應(yīng)。置酶標(biāo)儀492nm測(cè)各孔吸光值；
(4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取正常人血清0.2ml，加熱聚合人IsC(120ug/ml)0.2ml，再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml，置4℃ 過(guò)夜。同時(shí)做不加熱聚合人耽的正常血清比力，以排除血清中干擾因素。沉淀清洗同標(biāo)本把持。用稀釋的BSA緩沖液(加等量0.01mol/LpH7.4PBS)1.6ml溶解并稀釋成120、60、30、15、7.5ug/ml，與待測(cè)血清同法把持，制成工作標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(5)結(jié)果判斷：從待測(cè)血清吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可換算成相當(dāng)于熱聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S，即大于28.4ug/ml為陽(yáng)性。
3、注意事項(xiàng)
(1)熱聚合人IgC應(yīng)分裝貯存于-20℃，不宜反復(fù)凍融，否則易解聚；
(2)PEG的濃度影響CIC沉淀量，須嚴(yán)格配制。
