人增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒使用說明書
檢測原理:試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被PCNA抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
2. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 37℃恒溫箱
2. 酶標(biāo)儀(450nm)
3. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍，最終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
